呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）在我國屬于第三類體外診斷試劑產品，產品用于定性檢測人咽拭子樣本中的呼吸道病原體，包括甲型流 感病毒、乙型流感病毒（Victoria 系和 Yamagata 系）、腺病毒（B 組、 C 組、E 組）、呼吸道合胞病毒（A 亞型和 B 亞型）、肺炎支原體和百日咳鮑特菌。
引言：呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）在我國屬于第三類體外診斷試劑產品，產品用于定性檢測人咽拭子樣本中的呼吸道病原體，包括甲型流
感病毒（季節(jié)性 H1N1、新型甲型 H1N1 流感病毒（2009）、H3N2、H5N1、
H7N9）、乙型流感病毒（Victoria 系和 Yamagata 系）、腺病毒（B 組、
C 組、E 組）、呼吸道合胞病毒（A 亞型和 B 亞型）、肺炎支原體和百
日咳鮑特菌。本文為大家?guī)砗粑啦≡w六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）臨床試驗設計實例，一起看正文。
一、呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）主要原材料
本產品在制備過程中主要原材料包括 Carrier RNA、磁珠、引物、
探針、擴增反應液、含 FluA、B 假病毒、RSV 假病毒，AdV 假病毒、
M.P 質粒、B.P 質粒和 HEK293 細胞的混合液。其中 Carrier RNA、磁
珠、引物、探針、擴增反應液、FluA、B 假病毒、RSV 假病毒，AdV
假病毒、M.P 質粒、B.P 質粒為外購，HEK293 細胞為申請人自行生產。
申請人對主要原材料進行了供應商的選擇，通過功能性試驗，篩
選出合格供應商，制定了各主要原材料的質量標準并經檢驗合格。
企業(yè)參考品和質控品的設置情況
本產品企業(yè)參考品包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品
和精密度參考品。參考品均采用病原體培養(yǎng)物制備而成。組成如下：
陽性參考品：20 份，由試劑盒檢測位點各個基因型別的病原體培
養(yǎng)物組成。
陰性參考品：10 份，由試劑盒檢測范圍外的病原體培養(yǎng)物組成。
精密度參考品：3 份，由中強陽性、弱陽性和陰性濃度水平的病
原體培養(yǎng)物組成。
檢測限參考品：20 份，由包含試劑盒檢測位點各個基因型別的最
低檢測限濃度水平的病原體培養(yǎng)物組成
二、呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）穩(wěn)定性研究
申請人對本產品的效期穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性以及樣
本穩(wěn)定性進行研究，確定了在各種條件下本產品及樣本的有效保存時
間。
效期穩(wěn)定性：使用企業(yè)參考品對三批試劑按照技術要求檢測，分
別于試劑盒保存的第 0 個月、6 個月、10 個月、12 個月、15 個月進行
穩(wěn)定性試驗；檢測結果均符合技術要求。因此，試劑盒按照說明書要
求可保存 12 個月，檢測性能穩(wěn)定。
三、呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）臨床試驗設計實例
申請人在首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學附屬第三
醫(yī)院和濟南市兒童醫(yī)院共 3 家機構完成了臨床試驗。
入組人群為呼吸
道感染的患者，樣本類型為咽拭子。
針對甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原體核酸檢測，臨床試驗采用試驗體外診斷試劑與已上市同類產品進行比對，入組病例 2150 例。
針對甲型流感病毒，納入陽性病例 263 例，陰性病例 1887 例。試驗結果顯示，陽性符合率為 98.1%（95CI：95.6%，99.2%），陰性符
合率為 99.3%（95CI：98.8%，99.6%）；
針對乙型流感病毒，納入陽性病例 212 例，陰性病例 1938 例。試驗結果顯示，陽性符合率為 100%（95CI：98.2%，100%），陰性符合
率為 99.5%（95CI：99.1%，99.8%）；
針對腺病毒，納入陽性病例 277 例，陰性病例 1873 例。試驗結果顯示，陽性符合率為 96.4%（95CI：93.5%，98.0%），陰性符合率為
99.7%（95CI：99.4%，99.9%）；
針對呼吸道合胞病毒，納入陽性病例 224 例，陰性病例 1926 例。
試驗結果顯示，陽性符合率為 99.6%（95CI：97.5%，99.9%），陰性
符合率為 99.2%（95CI：98.7%，99.5%）；
針對肺炎支原體，納入陽性病例 251 例，陰性病例 1899 例。試驗
結果顯示，陽性符合率為 98.8%（95CI：96.5%，99.6%），陰性符合率為 99.3%（95CI：98.8%，99.6%）。針對百日咳鮑特菌核酸檢測，臨床試驗采用試驗體外診斷試劑與
Sanger 測序進行比較研究，共入組 2150 例病例，包括陽性病例 352
例，陰性病例 1798 例。試驗結果顯示，陽性符合率為 99.7%（95CI：
98.4%，99.9%），陰性符合率為 99.8%（95CI：99.5%，99.9%）。同
時還進行了與百日咳鮑特菌培養(yǎng)鑒定的比較，包括培養(yǎng)陽性病例 85
例，培養(yǎng)陰性病例 810 例。靈敏度為 98.8%（95CI：93.6%，99.8%），特異度為 70.1%（95CI：66.9%，73.2%）。針對與培養(yǎng)鑒定不一致的
樣本，均結合 Sanger 測序進行了確認。
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