呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）在我國屬于第三類體外診斷試劑產(chǎn)品，產(chǎn)品用于定性檢測人咽拭子樣本中的呼吸道病原體，包括甲型流 感病毒、乙型流感病毒（Victoria 系和 Yamagata 系）、腺病毒（B 組、 C 組、E 組）、呼吸道合胞病毒（A 亞型和 B 亞型）、肺炎支原體和百日咳鮑特菌。
引言：呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）在我國屬于第三類體外診斷試劑產(chǎn)品，產(chǎn)品用于定性檢測人咽拭子樣本中的呼吸道病原體，包括甲型流
感病毒（季節(jié)性 H1N1、新型甲型 H1N1 流感病毒（2009）、H3N2、H5N1、
H7N9）、乙型流感病毒（Victoria 系和 Yamagata 系）、腺病毒（B 組、
C 組、E 組）、呼吸道合胞病毒（A 亞型和 B 亞型）、肺炎支原體和百
日咳鮑特菌。本文為大家?guī)砗粑啦≡w六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)例，一起看正文。
一、呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）主要原材料
本產(chǎn)品在制備過程中主要原材料包括 Carrier RNA、磁珠、引物、
探針、擴(kuò)增反應(yīng)液、含 FluA、B 假病毒、RSV 假病毒，AdV 假病毒、
M.P 質(zhì)粒、B.P 質(zhì)粒和 HEK293 細(xì)胞的混合液。其中 Carrier RNA、磁
珠、引物、探針、擴(kuò)增反應(yīng)液、FluA、B 假病毒、RSV 假病毒，AdV
假病毒、M.P 質(zhì)粒、B.P 質(zhì)粒為外購，HEK293 細(xì)胞為申請人自行生產(chǎn)。
申請人對主要原材料進(jìn)行了供應(yīng)商的選擇，通過功能性試驗(yàn)，篩
選出合格供應(yīng)商，制定了各主要原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)檢驗(yàn)合格。
企業(yè)參考品和質(zhì)控品的設(shè)置情況
本產(chǎn)品企業(yè)參考品包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品
和精密度參考品。參考品均采用病原體培養(yǎng)物制備而成。組成如下：
陽性參考品：20 份，由試劑盒檢測位點(diǎn)各個基因型別的病原體培
養(yǎng)物組成。
陰性參考品：10 份，由試劑盒檢測范圍外的病原體培養(yǎng)物組成。
精密度參考品：3 份，由中強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性濃度水平的病
原體培養(yǎng)物組成。
檢測限參考品：20 份，由包含試劑盒檢測位點(diǎn)各個基因型別的最
低檢測限濃度水平的病原體培養(yǎng)物組成
二、呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）穩(wěn)定性研究
申請人對本產(chǎn)品的效期穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性以及樣
本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，確定了在各種條件下本產(chǎn)品及樣本的有效保存時
間。
效期穩(wěn)定性：使用企業(yè)參考品對三批試劑按照技術(shù)要求檢測，分
別于試劑盒保存的第 0 個月、6 個月、10 個月、12 個月、15 個月進(jìn)行
穩(wěn)定性試驗(yàn)；檢測結(jié)果均符合技術(shù)要求。因此，試劑盒按照說明書要
求可保存 12 個月，檢測性能穩(wěn)定。
三、呼吸道病原體六重核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)例
申請人在首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三
醫(yī)院和濟(jì)南市兒童醫(yī)院共 3 家機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗(yàn)。
入組人群為呼吸
道感染的患者，樣本類型為咽拭子。
針對甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原體核酸檢測，臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對，入組病例 2150 例。
針對甲型流感病毒，納入陽性病例 263 例，陰性病例 1887 例。試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率為 98.1%（95CI：95.6%，99.2%），陰性符
合率為 99.3%（95CI：98.8%，99.6%）；
針對乙型流感病毒，納入陽性病例 212 例，陰性病例 1938 例。試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率為 100%（95CI：98.2%，100%），陰性符合
率為 99.5%（95CI：99.1%，99.8%）；
針對腺病毒，納入陽性病例 277 例，陰性病例 1873 例。試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率為 96.4%（95CI：93.5%，98.0%），陰性符合率為
99.7%（95CI：99.4%，99.9%）；
針對呼吸道合胞病毒，納入陽性病例 224 例，陰性病例 1926 例。
試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率為 99.6%（95CI：97.5%，99.9%），陰性
符合率為 99.2%（95CI：98.7%，99.5%）；
針對肺炎支原體，納入陽性病例 251 例，陰性病例 1899 例。試驗(yàn)
結(jié)果顯示，陽性符合率為 98.8%（95CI：96.5%，99.6%），陰性符合率為 99.3%（95CI：98.8%，99.6%）。針對百日咳鮑特菌核酸檢測，臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)體外診斷試劑與
Sanger 測序進(jìn)行比較研究，共入組 2150 例病例，包括陽性病例 352
例，陰性病例 1798 例。試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率為 99.7%（95CI：
98.4%，99.9%），陰性符合率為 99.8%（95CI：99.5%，99.9%）。同
時還進(jìn)行了與百日咳鮑特菌培養(yǎng)鑒定的比較，包括培養(yǎng)陽性病例 85
例，培養(yǎng)陰性病例 810 例。靈敏度為 98.8%（95CI：93.6%，99.8%），特異度為 70.1%（95CI：66.9%，73.2%）。針對與培養(yǎng)鑒定不一致的
樣本，均結(jié)合 Sanger 測序進(jìn)行了確認(rèn)。
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